Simone
mi360问答RNA可以设计茎环引物反转录，用探针法或者染料法检测。这个引物设计都是固定格式的
miRNA引物设计（茎环法+染料法检测）
设计方法：通用茎环后端加miRNA后面6个碱基的反向互补序列为反转录引物，正向引物为miRNA去除后面6个碱基的序列，反再城派运棉京状加讲曾铁向引物在茎环上。
反转录茎环通用序列：
GTCGTATCCAGTGCG远攻善乙TGTCGTGGAGTCGGCAAT史者括虽衣告谓云想TGCACTGGATACGAC
miRNA序列：
>mmu-miR-99b-5pMIMAT0000132MusmusculusmiR-99b-5p
CACCCGUAGAACCGACCU格质乱善区顺随指点急UGCG
mmu-miR-99b-5p反转录颈环引物为：
GTCGTATCCAGTGCGT口万娘GTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACCGCAAG
定量PCR反向引物为：TGTCGTGGAGTCGGC
正向引物为：CACCCGTAGAACCGAC
备注：
1定量PCR反向引物和正向引物的TM值不要相差太大，反向引物衣TM已经确定，如果正向引物TM较低，则在5苏`端添加几个碱基（如：G）。
2染料法的检判践测可能会出现引物二聚体和非特异性扩增，可以使用探针法检测，探针法和染料法相似，只是茎环上不仅有一个反向引物结快坏季掌负临期合位点，还有一个探完促财应什针结合位点。
