Simone
一．实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质二．实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物,产生特定的颜色反应.1．可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用,可生成砖红色的Cu 2O沉淀.即Cu ( OH ) 2被还原成Cu 2O,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸.2．脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色）.3．蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应.（蛋白质分子中含有很多肽键,在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用,产生紫色反应.）4.淀粉遇碘变蓝色.三．实验材料1．做可溶性还原性糖鉴定实验,应选含糖高,颜色为白色的植物组织,如苹果、梨.（因为组织的颜色较浅,易于观察.）2．做脂肪的哗洞鉴定实验.应选富含脂肪的种子,以花生种子为最好,实验前一般要浸泡3-4小时（也可用蓖麻种子）.3．做蛋白质的鉴定实验,可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清.四、实验试剂斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液,碘液、蒸馏水.五、方法步骤：（一） 可溶性糖的鉴定1.制备组织样液.苹果或梨组织液必须临时制备，因苹果多酚氧化酶含量高,组织液很易被氧化成褐色,将产生的颜色掩盖.2.注入2mL组织样液.3.注入1mL新制的斐林试剂,振荡.（现配现用、先混后加）应将组成斐林试剂的甲液、乙液分衡码别配制、储存,使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测.斐林试剂很不稳定,甲、乙液混合保存时,生成的Cu ( OH ) 2在70-900C下分解成黑色CuO和水；甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应,无Cu ( OH ) 2生成.4.水浴加热：试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中,加热约2分钟,观察到溶液颜色：浅蓝色 → 棕色 → 砖红色（沉淀）最好用试管夹夹住试管上部,使试管底部不触及烧杯底部,试管口不朝向实验者.也可用酒精灯对试管直接加热.防止试管内的溶液冲出试管,造成烫伤；缩短实验时间.（二）脂肪的鉴定取材、切片、制片：花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片,将薄片放在载玻片的水滴中,用吸水纸吸去装片中的水.干种子要浸泡3-4小时,新花生的浸泡时间可缩短.浸泡时间短,不易切片,浸泡时间过长,组织较软,切下的薄片不易成形.切片要尽可能薄些,便于观察.染色：在子叶薄片上滴2-3滴苏丹Ⅲ（染色3分钟）或苏丹Ⅳ染液（染色1分钟）.染色时间不宜过长.漂洗：用吸水纸吸去薄片周围染液,用50%酒精洗去浮色,吸去酒精.酒精用于洗去浮色,不洗去浮色,会影响对橘黄色脂肪滴的观察.同时,酒精是脂溶性溶剂,可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴.用吸水纸吸去薄片周围酒精,滴上1-2滴蒸馏水,盖上盖玻片.滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡.镜检：先低后高（高倍镜用法：移物换器时针反）,低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄咐芦哪处,可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒.装片不宜久放.时间一长,油滴会溶解在乙醇中.三、蛋白质的鉴定制备组织样液.（浸泡、去皮研磨、过滤.）黄豆浸泡1至2天,容易研磨成浆,也可购新鲜豆浆以节约实验时间.加样液约2ml于试管中,加入双缩脲试剂A,摇匀；再加入双缩脲试剂B液3-4滴,摇匀,溶液变紫色.A液和B液也要分开配制,储存.鉴定时先加A液后加B液.CuSO4溶液不能多加.先加NaOH溶液,为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境.A、B液混装或同时加入,会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀,而失效.否则CuSO4蓝色会遮盖反应的真实颜色.可用蛋清代替豆浆.蛋清要先稀释.如果稀释不够,在实验中蛋清粘在试管壁,与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底,并且试管也不易洗干净.附：淀粉的检测和观察用试管取2ml待测组织样液,向试管内滴加2滴碘液,观察颜色变化.碘液不要滴太多，以免影响颜色观察
